轉氫酶-1檢測試劑盒

標題：轉氫酶-1檢測試劑盒

產品概述

轉氫酶-1檢測試劑盒

測定原理

NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的轉氫反應不能導致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸（APADP⁺）替代NADP⁺，TH-1催化 APADP⁺還原生成的APADPH在375nm有特征光吸收，因此通過測定375nm光吸收增加速率，來計算TH-1活性。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一：液體50mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：液體25mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：液體25mL×2瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2支，-20℃保存；

試劑五：粉劑×2支，-20℃保存；

工作液的配制：臨用前取試劑三、試劑四和試劑五各一支，將試劑四、五轉移到試劑三中混合溶解。這樣可以根據需要分兩批配制工作液，防止工作液失效。

TH-1的提取

• 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞，加入1.0 mL試劑一，用冰浴勻漿。
• 4 ℃ 600 g離心5min。
• 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心10min。
• 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的TH-1（此步可選做，可以判斷線粒體提取效果）。
• 在沉淀中加入500uL試劑二，超聲波破碎（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于TH-1活性和蛋白含量測定，蛋白質含量測定需要另外購買相應的試劑盒。

測定步驟：

1. 調零

用蒸餾水于375nm處調零。

1. 樣本測定

（1）取1mL工作液加入1mL玻璃比色皿，在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min。

（2）取出比色皿，加入100μL試樣本，混勻；立即記錄375nm處初始吸光值A1，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）中準確反應10min，記錄375nm處10min后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。

轉氫酶-1檢測試劑盒