線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ活性檢測試劑盒

標題：線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ活性檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ活性檢測試劑盒

測定意義

線粒體復合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶Q還原酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同時輔基FAD還原為FADH₂，后者進一步還原氧化型輔酶Q生成還原型輔酶Q，是呼吸電子傳遞鏈的支路。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制

試劑一：25mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：5mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：0.5 mL×1支，-20℃保存；

試劑四：液體25mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；

試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；

試劑七：液體2.5mL×1瓶，4℃保存；

工作液的配制：臨用前依次把試劑五和試劑六轉移到試劑四中混合溶解。

復合體Ⅱ的提取：

1. 準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2. 4 ℃ 600 g離心5min。
3. 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心10min。
4. 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅱ（此步可選做）。
5. 在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于復合體Ⅱ酶活性測定。

測定步驟：

1. 調(diào)零

用蒸餾水于605nm處調(diào)零。

1. 樣本測定

（1）取40μL酶液和800μL工作液加入1mL玻璃比色皿，在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min。

（2）取出比色皿，加入100μL試劑七，混勻；立即記錄605nm處初始吸光值A1，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）中準確反應2min，記錄605nm處2min后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。

線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ活性檢測試劑盒