二抗必須能識(shí)別一抗。如果一抗是小鼠單克隆抗體，分離類型是小鼠IgG1，那么二抗必須選擇抗小鼠IgG的抗體；同樣，如果一抗來(lái)源于山羊，二抗必須選擇抗山羊的抗體。 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗雞IgG

雖然可購(gòu)買能識(shí)別所有亞類的一般的抗小鼠IgG二抗，但盡可能購(gòu)買抗某一特定亞類的抗體以增加特異性。大多數(shù)物種的分離類型都是IgG，物種特異性抗IgG抗體能很好地工作。但注意鳥類或禽類的免疫球蛋白為IgY。 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗雞IgM

購(gòu)買二抗時(shí)注意分別選擇抗小鼠IgM和小鼠IgG的抗體。 小鼠IgG抗體還可以分為各種亞類，如IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG2c，IgG3。 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗雞IgM

二抗還必須對(duì)應(yīng)一抗的類和亞類。尤其是一抗是均質(zhì)的單克隆抗體時(shí)，這點(diǎn) 特別重要。例如，一些一抗分離類型是小鼠IgM，而有一些是IgG。IgM通常占血清免疫球蛋白的10%。IgM抗體在大多數(shù)抗原的早期免疫反應(yīng)中起著重要的作用，由于其體積較大，很大程度上局限于血漿中。 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗雞IgM

預(yù)吸附（又稱交叉吸附）是為提高抗體特異性而引入的額外步驟，具體方法是利用具有潛在交叉反應(yīng)性的物種）制備固定血清蛋白，然后使二抗混合物（例如含有抗兔 IgG 輕鏈、抗綿羊 IgG 輕鏈和抗牛 IgG 輕鏈的二抗）通過(guò)含有這種固定血清蛋白的基質(zhì)。IgM通常占血清免疫球蛋白的10%。IgM抗體在大多數(shù)抗原的早期免疫反應(yīng)中起著重要的作用。 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗雞IgM

如今的設(shè)計(jì)一般是二抗帶上可檢測(cè)標(biāo)記，再來(lái)檢測(cè)一抗。而一抗識(shí)別底物。這樣，當(dāng)一抗結(jié)合到底物上，就可以通過(guò)二抗檢測(cè)出來(lái)。 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗雞IgM