大多數(shù)物種的分離類型都是IgG，物種特異性抗IgG抗體能很好地工作。但注意鳥類或禽類的免疫球蛋白為IgY。生物素是一種水溶性維生素，一般歸類為B復合維生素，又稱維生素B4。 Alexa Fluor 488標記的兔抗生物素抗體IgG

購買能識別所有亞類的一般的抗小鼠IgG二抗，但盡可能購買抗某一特定亞類的抗體以增加特異性。生物素是一種水溶性維生素，一般歸類為B復合維生素，又稱維生素B4。 Alexa Fluor 350標記的兔抗生物素抗體IgG

小鼠IgG抗體還可以分為各種亞類，如IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG2c，IgG3。生物素是一種水溶性維生素，一般歸類為B復合維生素，又稱維生素B4。 APC標記的兔抗生物素抗體IgG

一些一抗分離類型是小鼠IgM，而有一些是IgG。購買二抗時注意分別選擇抗小鼠IgM和小鼠IgG的抗體。生物素是一種水溶性維生素，一般歸類為B復合維生素，又稱維生素B4。 PE-CY5標記的兔抗生物素抗體IgG

二抗還必須對應一抗的類和亞類。尤其是一抗是均質的單克隆抗體時，這點 特別重要。生物素是一種水溶性維生素，一般歸類為B復合維生素，又稱維生素B4。 PE-Cy3標記的兔抗生物素抗體IgG

預吸附（又稱交叉吸附）是為提高抗體特異性而引入的額外步驟，具體方法是利用具有潛在交叉反應性的物種（本例中為綿羊和牛的輕鏈）制備固定血清蛋白，然后使二抗混合物（例如含有抗兔 IgG 輕鏈、抗綿羊 IgG 輕鏈和抗牛 IgG 輕鏈的二抗）通過含有這種固定血清蛋白的基質。生物素是一種水溶性維生素，一般歸類為B復合維生素，又稱維生素B4。 PE標記的兔抗生物素抗體IgG