慶祝我司合作客戶成功發(fā)布關(guān)于腦缺血損傷的文獻

標(biāo)題：《GPR91在小鼠深低溫低流量腦缺血再灌注損傷中的作用及機制研究》

摘要：背景:深低溫低流量技術(shù)(Deep Hypothermic Low Flow,DHLF)是目前主流的體外循環(huán)技術(shù),在心臟手術(shù)的過程中,其不僅能保證大腦的基礎(chǔ)代謝和氧氣消耗,還能提高神經(jīng)細(xì)胞對缺氧的耐受能力,減輕心臟手術(shù)過程中的神經(jīng)損傷。然而經(jīng)過長時程的DHLF后,中央神經(jīng)系統(tǒng)仍會出現(xiàn)較嚴(yán)重的缺血再灌注損傷,意識障礙、認(rèn)知障礙和神經(jīng)心理學(xué)障礙等神經(jīng)系統(tǒng)的損傷均已見報導(dǎo)。GPR91是線粒體相關(guān)的G蛋白偶聯(lián)受體,其在DHLF病理過程中的具體機理目前還不清楚。因此,本次研究擬探討GPR91在DHLF后腦缺血再灌注損傷中的具體作用和分子機制,為尋找分子干預(yù)的有效靶點提供理論基礎(chǔ)。 方法:本次研究將通過生物信息學(xué)分析,探究m RNAs表達譜情況;通過q RTPCR技術(shù)檢測患兒DHLF前后血液中GPR91表達水平;建立DHLF模型,通過q RT-PCR和Western Blot技術(shù)驗證GPR91在DHLF模型大腦皮層m RNA和蛋白的表達;應(yīng)用HE染色、尼氏染色、曠場實驗、斯金納箱實驗和改良行為學(xué)評分檢測小鼠神經(jīng)損傷程度;通過Western Blot技術(shù)驗證GPR91、PKCδ、磷酸化PKCδ、Bax、Bcl-2、P53等蛋白的表達情況;建立深低溫糖氧剝離再灌注模型,應(yīng)用si RNA和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù),結(jié)合流式細(xì)胞學(xué)、免疫熒光染色及免疫印跡等實驗,通過體內(nèi)和體外實驗驗證GPR91對PKCδ/P53的調(diào)控和對凋亡的影響。 結(jié)果:生物信息學(xué)的結(jié)果顯示,G蛋白偶聯(lián)受體、PKC和P53參與腦缺血再灌注損傷后的生物性過程和信號轉(zhuǎn)導(dǎo),GPR91是腦缺血再灌注損傷的關(guān)鍵基因,q RT-PCR結(jié)果表明,在患兒DHLF后的血液樣本中,GPR91m RNA的表達明顯升高。q RT-PCR和Western Blot驗證結(jié)果表明,在DHLF小鼠模型的腦組織中,GPR91 m RNA和蛋白的表達有明顯的升高。敲除GPR91可使DHLF模型后的小鼠壞死的神經(jīng)細(xì)胞減少,同時也可使小鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力得到提高。體外實驗證實,在GPR91敲除深低溫糖氧剝離再灌注(h OGD-R)造模后,ROS下降,JC-1升高,Bax、磷酸化和總PKCδ,P53的表達明顯減少Bcl-2的表達明顯上升,而磷酸化后的PKCδ,其表達下降的幅度比PKCδ的表達下降的幅度要大,ROS升高,JC-1下降。在抑制PKCδ,h OGD-R造模后,Bax、P53的表達明顯減少,ROS下降,JC-1上升,Bcl-2的表達明顯上升,回復(fù)實驗表明,GPR91可以通過磷酸化PKCδ,使P53表達水平提高,ROS升高,JC-1下降,進而使細(xì)胞凋亡減少。 結(jié)論:本研究揭示了GPR91在小鼠DHLF腦缺血再灌注損傷中的調(diào)節(jié)機制,GPR91通過調(diào)控PKCδ/P53信號通路影響線粒體功能從而使神經(jīng)細(xì)胞凋亡損傷腦組織。